一步法质粒DNA抽提试剂盒(0.1～1.5mL)

产品货号：

GS0053

中文名称：

一步法质粒DNA抽提试剂盒(0.1～1.5mL)

英文名称：

One-step Plasmid Preps Kit(0.1-1.5mL)

产品规格：

50次

发货周期：

1～3天

产品价格：

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本试剂盒对传统的碱式裂解法提取质粒DNA进行了改良，将碱式裂解法中的菌体重悬、裂解和中和三个步骤合并为一步，随后将质粒DNA结合至吸附柱中，通过洗涤步骤去除其他杂质，最后洗脱得到高纯度的质粒DNA。本试剂盒一次可以处理0.1～1.5mL菌液，获得5μg质粒DNA。所得到的质粒OD₂₆₀/OD₂₈₀比值一般在1.8～1.9之间，可直接用于测序、酶切、转化等后续实验。

产品特点：

细菌裂解速度超快。
裂解液比传统强碱裂解液温和，避免质粒DNA损伤。
操作过程快速、方便，全过程可在10min内完成。

产品组成：

组分	规格
Lysis Buffer UF	50mL
Prewash Solution	30mL
Wash Solution（Concentrate）	12mL
Elution Buffer	5mL
吸附柱及收集管	50套

保存事项：
试剂盒于常温运输，Lysis Buffer UF 2～8℃保存，其他成分室温（15～25℃）保存，有效期见包装。
Lysis Buffer UF中含有刺激性的化合物，操作过程中应穿上实验服，戴好乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，防止吸入口鼻。沾染皮肤或眼睛后，请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮助。

准备工作：

自备试剂：无水乙醇等。
按瓶身标签说明在Wash Solution中加入4倍体积的无水乙醇，混匀后在瓶身做好标记，于室温密封保存。每次使用后将瓶盖盖紧，以保持Wash Solution中的乙醇含量。若Wash Solution由于运输或保管不当造成容量不准，请用量筒定容后再加入相应体积的无水乙醇。

操作步骤：

在含合适抗生素的培养基中接种目标菌株，于37℃摇床充分振荡培养12~16h。
● 菌液状态对质粒得率非常关键，请用不超过容器容量1/4体积的培养基进行培养。
● 处于生长平台期的菌体用于质粒抽提得率最高，过度培养可能导致DNA降解。
对于高拷贝质粒，取0.1～1mL菌液，10000rpm离心3min收集菌体，倒尽或吸干培养基。
● 对于低拷贝数的质粒，可适当增加菌液用量，最多不要超过1.5mL。
● 如果使用更多的菌液，则同一个样品分多管收集，分别裂解，合并同一个样品的各管裂解液通过同一个吸附柱来获得更高的得率。
在菌体沉淀中加入700μL Lysis Buffer UF，吸打或振荡至彻底悬浮菌体。室温放置3min。
● 一定要彻底悬浮菌体，否则影响得率和质量。
将裂解液全部小心移入吸附柱，室温放置1min，8000rpm离心2min。倒掉收集管中的液体，将吸附柱放入同一个收集管中。
● 如果裂解液较多，可以重复该步骤直至所有裂解液流过吸附柱。
向吸附柱中加入500μL Prewash Solution，8000rpm离心2min。倒掉收集管中的液体，将吸附柱放入同一个收集管中。
向吸附柱中加入500μL Wash Solution，8000rpm离心1min。倒掉收集管中的液体，将吸附柱放入同一个收集管中。
● Wash Solution首次使用前请检查是否已加入正确量的无水乙醇。
重复步骤6一次。
将空吸附柱和收集管放入离心机，8000rpm离心2min。
● 此步绝不可省略，否则残余的乙醇会严重影响得率和后续实验。
将吸附柱放入干净的1.5mL离心管中，在吸附膜中央加入50μL Elution Buffer，室温静置2min，8000rpm离心2min。
将所得到的质粒DNA溶液置于-20℃保存或用于后续试验。
● Elution Buffer为2.5mM Tris-HCl，pH8.5，可以用TE或水（pH> 7.0）代替。
● 将Elution Buffer预热至60℃可以进一步提高得率。
● 请勿使用小于30μL的洗脱液进行洗脱。

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